En el 2009
Durante el semestre pasado pudimos obtener y optimizar métodos de lisado, cuantificación de proteínas, electroforesis e “immunoblotting” con los cuales estamos seguros de que podemos detectar el canal de calcio llamado receptor de IP3 (IP3R). Todo esto se hizo con “HeLa cells”, línea de células de carcinoma cervical. Precisamente la primera meta para este semestre es lograr hacer lo que se hizo el semestre pasado pero con una línea de células procedente de un linfoma de linfocitos B. Al finalizar este semestre también esperamos poder haber inmunoprecipitado el IP3R junto con proteínas que este interaccionando (que se conoce como co-inmunoprecipitación) e identificar estas, de ser el caso.
Como mencioné, voy a estar intentando hacer co-inmunoprecipitación. Para esto lo que seva a añadir el anticuerpo para IP3R (anti-IP3R) al lisado celular para que se forme el complejo anticuerpo-proteína. A estos complejos se le conocen como complejos inmunes. Luego se incubara con agarosa que contiene proteína A. La proteína A interacciona con el anti cuerpo del complejo inmune. Al hacer centrofugación, se precipitara la agarosa con proteína A, y el anticuerpo que a su vez tiene el IP3R y cualquier proteína que estuviera interaccionando con el receptor en la célula. Luego la muestra se analizara con SDS-PAGE y Western Blof utilizando distintos anticuerpos para analizar si el receptor esta interaccionando con alguna proteína.
